Visium 空間的遺伝子発現

 

  • 組織内の細胞の位置情報を保ったまま、RNA発現解析
  • H&E染色画像と、遺伝子発現マップを比較検討

Visium 空間的遺伝子発現解析では組織切片から、細胞の位置情報を保持したまま、遺伝子発現解析を行うことが可能です。

6.5 mm x 6.5 mmの区画内に載せた組織から、4,992スポットの細胞を解析できます。1スポットで平均1〜10個の細胞を捕捉し、1スポットに1種類のバーコードを付与して位置情報を保ったままmRNA解析が可能です。 1スポットは直径55 µmで、スポットの中央点は100 µmの間隔で位置しています。

解析可能なサンプル

サンプル新鮮凍結OCT包埋サンプル
動物種全生物種
(検証済み組織リストはこちら
解析メカニズム組織中のmRNAをpolyA鎖を介して捕捉し発現遺伝子を検出します。
サンプル受け入れ条件詳細情報ページにまとめております。

解析例

ライブラリ調製前に組織をH&E染色し、染色画像と遺伝子発現解析マップを重ね合わせることで、細胞の特徴と実際の遺伝子発現を比較できます。

Visium FF 解析例(マウス大脳)
Clustering

納品物

委託範囲により下記のようになります。

当社がシーケンスを行う場合

  • Fastqデータ
  • Space Ranger解析結果
    • Web Summary
    • cloupeファイル
    • Matrixファイル
    • csvなど
  • 画像データ
    • H&E染色画像ファイル
  • 情報シート
    (解析方法や使用試薬などをまとめたもの)
  • 実験情報まとめ
    (ライブラリの測定結果)

お客様がシーケンスをされる場合

  • ライブラリー
  • 情報シート
  • 実験情報まとめ
  • 画像データ
    • H&E染色画像ファイル

料金・納期

受託内容サンプル金額(税別)おおよその納期
Visium TO新鮮凍結切片¥ 260,000
(1スライド当たり)
3週間
Visium GEX新鮮凍結切片¥ 2,680,000
(4サンプル当たり)
6週間

ご依頼前のチェック項目

サンプル受け入れ条件、事前ご確認事項を「詳細情報」ページにまとめておりますので、ご確認ください。

よくあるご質問

Visiumで解析できるサンプルは何ですか。

以下の10x社ホームページに記載がある組織で、Visiumの再現性が確認されています。こちらに載っていない組織でもご委託は可能ですが、結果の保証ができない点について、ご了承いただく必要がございます。

凍結組織で再現性が確認されている組織

  • ヒト
    • 健常人検体:小脳、大脳皮質、側頭葉、脊髄、リンパ節、肺、乳房、心臓、腎臓
    • 非健常人検体:脳(多形性膠芽細胞腫)、リンパ節(リンパ節炎)、肺(乳頭癌)、乳房(浸潤性乳管癌、浸潤性小葉癌)、心臓(心筋梗塞)、脾臓(膵臓炎)、大腸(大腸がん)、卵巣(腫瘍)、腎臓(腎炎)
  • マウス
    • 健常検体:脳(胎生期E15/E18、出生後P1/P8)、目、嗅球、舌、肺、心臓、胃、肝臓、脾臓、小腸、大腸、大腿四頭筋、腎臓、卵巣、精巣
  • ラット
    • 健常検体:脳、嗅球、心臓、腎臓
  • ゼブラフィッシュ
    • 健常検体:稚魚(10 dpf)

膵臓や骨組織、脂肪を多く含む組織については10x社で再現性が取れていない組織となっております。

Visiumの解像度はどれくらいですか。

スポット直径55 µmで、スポットの中央点は100 µmの間隔で位置しています。 組織種によりますが、1スポット当たり10細胞程度含まれます。

Visiumに使用する凍結ブロックを作成するには、組織にどのような処理が必要ですか。

組織を出来るだけ傷つけないよう、液体窒素上でイソペンタンに浸け急速凍結させ、OCTで包埋してください。詳細なプロトコルはこちらをご確認ください。

なおご委託の際には、以下のご確認をお願いしております。

  • OCT包埋後に10 µmの切片10枚を使用し、RNA抽出でRIN値をご確認いただき、7以上あることを確認(規定プロトコルあり)
  • H&E染色画像を撮影し、組織像に崩れがないか確認

納品物は何でしょうか。

お客様がシーケンスをされる場合、ライブラリを作製しお送りします。当社がシーケンスをする場合、シーケンス結果のFastqファイルとSpace Ranger(解析ソフトウェア)での解析結果のデータをお送りします。

自分でシーケンスする場合、シーケンスの条件はどのようにしたらよいでしょうか。

10x Genomics社のVisiumアプリケーションでは、以下の条件でのシーケンスが推奨されています。

リード数:50,000リード以上/スポット
Read 1:28 cycle
i7 Index:10 cycle
i5 Index:10 cycle
Read 2:90 cycle

データはどのように保管されますか。

解析データやお客様のサンプル情報等は納品後、3ヵ月まで当社内で保管しています。3ヵ月を経過すると廃棄しますので、予めご了承ください。